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VOIs或VOCs的三聚刺突蛋白

水。微生物分析试验方法指南

水测试工具的安全与支持

重点:

  • 微生物水测试寻找指示生物作为粪便污染的标志,而不是检测特定的病原体
  • 必须遵守国际标准规程所规定的正确取样程序
  • 饮用水供应、娱乐用水和环境用水的常规微生物检测对保护公众健康至关重要

项目的测试

检查水源是否受粪便污染的最有效方法是微生物分析,为此目的已经为水工业开发了一系列测试方法。2021欧洲杯德国vs意大利竞猜微生物学家不是对水中可能存在的每一种潜在病原体、病毒或寄生虫进行单独的检测,而是检测当肠道病原体和病毒出现时总是存在的指示生物。

大肠菌群和其他指示生物

大肠菌群指的是一组革兰氏阴性菌,它们能在35ºC或44/44.5ºC条件下发酵乳糖并在48小时内产生气体。这些特性使得在实验室中易于分离、检测和枚举,是微生物水测试的金标准。当在水测试中检测到肠道病原体或病毒时,它们总是存在。然而,高“总大肠菌群”计数并不一定意味着粪便污染,需要第二步从环境中发现的大肠菌群中识别粪便大肠菌群。埃希氏杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌是粪便大肠菌群吗枸橼酸杆菌属沙雷氏菌属存在于植物和土壤中。

粪便大肠菌群,也被称为耐热大肠菌群,可以在44ºC和44.5ºC的温度下存活,这使得两种类型可以简单地区分。微生物学家将寻找粪便大肠菌群的数量,例如大肠杆菌,它们唯一的栖息地是肠道,它们在肠道之外的生命是短暂的;被视为理想的指示生物。它存在于饮用水样本中意味着该水不适合人类饮用。

粪便链球菌的存在Enterococci是粪便污染的证据粪链球菌往往比耐热或总大肠菌群在环境中坚持更久,并且高度耐干燥。因此,有可能从含有少量或不含耐热大肠菌群的水中分离粪便链球菌,例如,当污染源在时间或空间上距离取样点较远时。粪链球菌在含叠氮化钠的介质中或介质上生长,温度为37-44℃。它们通常通过染料(通常是含四唑化合物)的还原或七叶藻素的水解来检测。传统方法可能会产生“假阳性”,可能需要额外的确认性测试。

快速的方法:IDEXX开发的Defined substrate technology®(DST)可以在24小时内产生结果。IDEXX Colilert采用比色法ONPG测定检测大肠杆菌群和荧光马克杯试验大肠杆菌。根据产品的不同,Colilert可以在18-24小时内同时检测到这些细菌。每100 mL还能抑制200万异养菌。它已经被美国环保局批准,并被列入美国水和废水检测标准方法。从2014年开始,IDEXX的这项技术已经作为欧洲标准方法发布,现在许多国家都将这项技术作为水测试的黄金标准,例如芬兰和爱尔兰。

IDEXX的Enterolert测试使用专有的定义基质技术(DST)营养指标检测enterococci.这种营养指标在肠球菌代谢时发出荧光。DST提高了准确度,并避免了对传统介质中使用的有害叠氮化钠抑制剂的需要。

膜过滤:典型的MF水分析方法是将已知体积的水通过无菌膜过滤器,其孔径小到足以保留细菌细胞(通常为0.45µm)。然后以无菌方式将过滤器转移到琼脂平板或饱和了合适的选择性培养基并培养的吸收垫的表面。菌落可以在过滤器表面形成,可以直接计数和检查。MF方法是快速和容易执行,需要很少的培养箱空间,并可以处理大量的水,如果需要。在过去的30年里,它们已经成为水质微生物检测指示生物的首选方法。有一些官方公布的基于MF的方法,特别是一系列ISO方法,如ISO 9308-1大肠菌群和大肠杆菌肠球菌ISO 7899-2。

文化媒体:许多选择性培养基已被开发用于检测指示生物在水中的MF方法。推荐大肠菌群和大肠杆菌包括膜硫酸月桂醇琼脂或琼脂,MI琼脂和琼脂,膜乳糖葡萄糖醛酸琼脂。膜肠球菌琼脂(mEA)和膜肠球菌Indoxyl-ß-D-Glucoside琼脂(mEI)可用于肠球菌的检测和计数,胰糖亚硫酸环丝氨酸琼脂不含蛋黄可用于培养perfringens梭状芽胞杆菌膜过滤器。铜绿假单胞菌也可用琼脂假单胞菌MF法检测。

进一步的培养或生化测试可以用来确认可疑菌落的身份,这些菌落生长在放置在选定培养基上的过滤器上。在水微生物学中越来越多地使用显色和荧光介质。通过含有显色或荧光基团的底物检测目标细菌中的特定酶,产生高度诊断性的彩色菌落,这些培养基可以比其他选择性培养基更不苛刻,从而产生更少的假阴性结果,并减少确认结果所需的时间。例如,默克公司生产的ChromoCult®培养基系列和BBL™用于水测试的制备显色培养基系列。

传统文化:倾注和平板计数法对水中指示生物和病原体的检测不够灵敏,尽管它们仍被常规用于计数异养细菌。需要能够检测更大体积水(通常为100毫升)的方法。多年来,选择的方法是多管“最可能数”(MPN)技术,在该技术中,测量体积的水样被添加到一系列含有差异介质的管中并培养。

生长是由介质中的颜色变化来表示的,结果是由正极管的分布来计算的。虽然该方法简单,在设备和材料方面不贵,但它是劳动密集型和需要大量的孵化器空间。这也是一种间接的方法,不允许对单个菌落进行进一步的检查。对常规水微生物的MPN检测现在已在很大程度上被膜过滤方法所取代,尽管膜过滤方法仍可用于小型实验室或现场偶尔进行的检测,而且基于MPN方法的大肠杆菌和肠球菌的商业检测试剂盒也可用。

军团菌在冷却塔

测试军团菌冷却塔内的Sp.应定期进行,并且必须是工厂测试计划的一部分。军团菌瞭解,例如,它是一种喜热的生物体,比大多数细菌对氯有更高的耐受性,可以生活在寄生虫的细胞中,保护自己免受这些清洁方法的伤害。冷却塔提供了合适的条件l . pnuemophila不幸的是,它提供了一个完美的传播途径,通过飞沫进入大气,在那里它可能被附近的人吸入,导致肺炎。查阅有关测试水的产品的资料军团菌至:军团菌检测与识别方法

水质参数

除了对指示生物和某些特定病原体的检测外,还例行进行非选择性菌落计数,以确定存在的异养细菌的数量。计数在两个温度(22oC和37oC)通常用于提供有关水的一般微生物种群的信息,并检测水质的突然变化。过去曾使用37摄氏度的计数来表明粪便污染,但一般认为这并不可靠。

快速的方法:尽管大多数官方的水微生物分析方法仍然依赖于传统的培养方法和MF方法,但获得结果所需的时间(通常为24-48小时)已使人们的注意力集中在替代的快速方法上。MF与QPCR检测枚举相结合是一种特别快速、有效的水样分析方法。这种方法的主要缺点是,它可能会检测出非活细胞,并过高估计其数量,但基于qpcr的方法在水微生物学中可能会变得越来越重要,从而导致与那些已经用于食品分析的产品类似的商业产品的开发。

SARS-CoV-2爆发在荷兰进行的一项研究中,在污水处理厂的污水中发现了病毒RNA的痕迹。采用RT-PCR方法对3个核衣壳蛋白基因片段(N1-3)和1个包膜蛋白基因片段(E)进行检测,其中N1引物/探针组对污水中SARS-CoV-2的检测灵敏度最高,其次为N3和E组。

近年来,水微生物学家越来越意识到生物膜对水系统微生物种群的重要性。生物膜现在被认为是复杂的微生物群落,形成于表面。生物膜通常由多种微生物细胞组成,可能包括病原体,在由某些细菌分泌的胞外多糖(EPS)组成的基质中。生物膜会随着时间的推移而发展,变得更加复杂和广泛,并能保护单个细菌细胞免受水中氯和其他抗菌化合物的伤害。

众所周知,生物膜很难从表面去除,当细菌细胞从基质脱落到周围的水中时,它可能会成为微生物污染的一个零星来源。现在人们认识到,饮用水分配系统中的大多数细菌都存在于生物膜中,而不是自由地生活在水里。从生物膜中分离出的病原体包括鼠伤寒沙门氏菌弯曲杆菌sp。铜绿假单胞菌气单胞菌属吸湿的一个。军团菌瞭解目前已知是居住用水系统的主要病原体,因为它倾向于在供水管道上和微生物寄生虫细胞内形成生物膜。生物膜可能会影响一般的微生物水质,产生令人讨厌的味道和气味,并加速分配系统内的腐蚀。

显著的生物膜生长的存在可能使获得代表性水样变得困难,并可能影响微生物分析的结果。高异养平板计数可能指示分布系统中生物膜的形成。在某些情况下,可能有必要直接使用拭子取样生物膜,或允许薄膜在可移动金属板表面显影,或在特殊设计的管道内显影。

膜过滤

典型的MF水分析方法是将已知体积的水通过无菌膜过滤器,其孔径小到足以保留细菌细胞(通常为0.45µm)。然后以无菌方式将过滤器转移到琼脂平板或饱和了合适的选择性培养基并培养的吸收垫的表面。菌落可以在过滤器表面形成,可以直接计数和检查。MF方法是快速和容易执行,需要很少的培养箱空间,可以处理大量的水,如果需要。

在过去的30年里,它们已经成为水质微生物检测指示生物的首选方法。有一些官方公布的基于MF的方法,特别是一系列ISO方法,如ISO 9308-1大肠菌群和大肠杆菌肠球菌ISO 7899-2。

美国环境保护署(EPA)发布了官方的水质微生物测试方法。实验室定期检测饮用水,娱乐用水和环境样本应该使用当地执法机构推荐的适当的官方方法。当实验室检测食品加工等工业用水时,建议使用同样的方法检测饮用水。

在设备方面,MF方法需要合适的过滤设备,包括一个支撑多孔圆盘的底座,过滤器放置在上面,和一个无菌过滤漏斗,可以固定在底座上,将过滤器夹紧在位置上。市面上有各种各样的过滤系统,包括多套以歧管形式存在的装置,这样就可以一次过滤多个样品。

为方便起见,还备有一次性使用的无菌过滤漏斗。供应商包括Millipore, Sartorius和Membrane Solutions。过滤单元连接到合适的真空源,通过过滤器抽取样品。这可能是一个真空管道或一个独立的泵单元。紧凑型泵单位特别设计使用MF方法,现在可以得到。例如,Millipore EZ-Stream装置可以将过滤后的样品直接排干,从而节省了用传统实验室真空泵排空和清洗废弃样品容器的时间。多种膜过滤器可用于不同的应用,但微生物水分析通常使用直径47mm、0.45µm孔径的混合纤维素酯基过滤器。过滤器通常用网格标记以辅助菌落计数。

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