RMB.
用于vois或VOC的三聚体尖峰蛋白

生物负荷试验。快速微生物学方法

云母生物负荷快速测试

Marcel Goverde介绍了用于生物负载测试的RMM,MGP咨询有限公司、瑞士

根据FDA工业指南(2004),生物负荷的定义如下:灭菌前与特定物品相关的微生物总数。”

EudraLex(2010)和PIC(2007)给出了生物负荷的另一个定义:原料、原料药起始原料、中间体或原料药中可能存在的微生物的水平和类型(例如,不良或不不良)。生物负荷不应被视为污染,除非已超过水平或已检测到确定的有害生物。”

一般而言,生物负荷试验通常被视为对用于非肠道产品的散装溶液进行的试验,无论是无菌生产的还是最终灭菌的。所使用的方法是膜过滤法、平板计数法或MPN,符合欧洲药典2.6.12或美国药典。根据定义,这些方法被视为经e药典。每当采用不同的方法时,建议根据欧洲药典5.1.6、USP或PDA TR第33号(2013年)对该方法进行验证,并证明与药典方法等效。此类验证适用于替代或快速微生物方法(RMM)由供应商或一些制药公司提供并执行。

然而,每个应用自己的RMM的公司都应该根据其预期的目的验证方法。由于市场上有几种应用,下文将介绍一些rmm,这些rmm可以用于生物负荷检测,而不必声称是详尽无遗的。

在评估生物负荷检测的RMM时,一个基本问题是所需的检测限度。10 cfu/100 ml的可接受标准通常用于肠外产品的生物负荷(EMEA 1996),然而,它可以更高,如生物技术原料药,然后可以使用其他检测灵敏度较低的方法。

生物负荷检测的可能rmm

  • 自动检测增长:通常情况下,用琼脂平板培养3-7天,然后用肉眼评估微生物的生长情况。因此,使用一种能够及早检测微生物生长的方法是一种很好的替代方法,而且验证工作也不那么复杂。市场上有几种这样的方法,下文将对此进行描述。为了实现全自动、可追踪的菌落计数,bioMerieux公司的EviSight Compact在智能培养箱中孵育平板,每30分钟拍摄高分辨率照片,特定的算法检测任何生长情况,报告的结果包括平板的生长曲线和最后的图像。

  • 染色:可过滤产品按照药典方法进行处理,但在孵育后(通常比人眼评估的样品时间短),它们用CFDA(羧荧光素二乙酸酯)染色,CFDA是一种非荧光基质。在细胞内,CFDA被切割成羧基荧光素,其可由Millipore-Milliflex®量子系统检测到,比人眼可检测到的菌落更早。至于药典方法,检测限为1 cfu,可以鉴定分离物。该系统已经过验证,该验证将在2016年底前公布(Goverde等人,准备)。

  • 自体荧光我:利用激光(通常为405 nm)可实时检测微生物的自荧光,如BioVigilant公司的IMD-WTM。这样的系统可以处理水样;然而,作者并不知道他们如何使用产品。该仪器可以作为一个在线系统使用,即不需要生长步骤。检测限为1 cfu,但cfu不是基于生长的,不仅能检测生长种,还能检测VBNC(可活但不可培养)。因此,挑战在于系统计数与药典方法的cfu之间的相关性。如果检测到的溶液被捕获,应该能够识别隔离物。

  • 自体荧光二:另一个通过自身荧光检测微生物的系统是Growth Direct™(RapidBioMicrosystem)。产品过滤后,培养皿进行培养。然后系统会自动对微生物的生长情况进行定期检查(例如每4小时一次)。因此,生物负荷比传统方法(由人眼读出)更早被检测到。这样的系统使验证工作更容易,因为一般来说,与药典方法一样,系统只执行读出。此外,该系统是完全自动化的,可以连接到LIMS系统。检出限为1 cfu;该分离物的鉴定是可能的。

  • ATP-Bioluminescence:ATP是细胞活力的一般标志,因此存在于每个活细胞中。将产品过滤,放在琼脂平板上,并按照药典方法孵育。经过验证的孵育时间后,细胞被裂解,ATP可以被检测到,例如使用Milliflex®Rapid系统(默克Millipore)。这样就得到了一个真实的cfu计数。然而,这种系统的挑战在于,当快速生长的微生物也存在时,如何检测或正确计数缓慢生长的微生物。它可能不可能计数的cfu,因为快速增长发出的光将太强的读数。该方法的检出限为1 cfu;通常需要24-72小时的潜伏期。虽然这是一种破坏性的方法,但污染物的识别是可能的(Gray et al. 2011)。

  • 流式细胞术:流式细胞术可以用于生物负荷,如bioMérieux的Scan®RDI(使用激光细胞仪技术,尤其是在接受标准很高的情况下。在流式细胞术中,微生物被荧光团标记,然后由该系统计数。流式细胞术和固体细胞术都是接近实时的检测。流式细胞术简便易行,但其检出限在100-1000 cfu。固相细胞检测法的检测限为1 cfu,但该方法耗时且不可能进行鉴定。

  • 内毒素:最后,由于可能存在潜在的革兰氏阴性菌并产生内毒素,因此越来越多地要求进行大量溶液内毒素检测。传统的方法已经相当快,但必须在实验室中进行。查尔斯·里弗开发了一种手持设备(Endosafe®-PTS™),可直接在使用地点使用。结果将在15分钟内公布。访问我们的内毒素检测方法指南

需要验证上述一些方法比其他方法更容易在日常使用中进行验证。例如,Endosafe®-PTSTM使用与药典方法相同的试剂。有些方面(如存档的标准曲线)需要进行验证工作,但比使用药典系统(如ATP检测)时要少得多。此外,如果这些方法用于过程控制或故障排除,则可以减少验证工作。

总之,用户必须对每种方法进行严格评估,以确定其是否适合其需要,以及所涉及的验证工作的级别。这些方法非常有吸引力,有助于减少工作量,但投资必须事先计算。

工具书类EMEA 1996,专有药品委员会(CPMP),成品剂型制造指南说明,CPMP/QWP/486/95。EudraLex(2010年)。欧盟管理医药产品的规则。第四卷。良好制造规范。人类和兽医用医药产品。第二部分:用作起始材料的活性物质的基本要求。FDA(2004年)。工业指南-无菌加工生产的无菌产品-当前生产实践。PDA(2013年)。第33号技术报告。替代和快速微生物方法的评估、验证和实施。Goverde M.,Staerk A.,Roesti D.(准备中)。验证用于药物散装溶液生物负载测试的Millipore Milliflex®Quantum。Gray J.C.,Morandell D.,Gapp G.,Le Goff N.,Neuhaus G.,Staerk A.(2011)。Milliflex快速检测后的微生物鉴定-在Milliflex快速无菌检测中鉴定非无菌结果的可能性。PDA制药科学与技术杂志,65(1),第42-54页。欧博士。第2.6.7章(当前版本)。支原体。欧洲药典,第2.6.12章。(当前版本)。非无菌产品的微生物检验:微生物计数试验。欧洲药典,第5.1.6章。(当前版本)。控制微生物质量的替代方法。PIC/S(2007年)。医疗产品良好制造规范指南。药品检验合作计划,PE 099-06(第二部分)。USP,第章(当前版本)。验证替代微生物方法。USP,第章(当前版本)。非无菌产品的微生物检验:微生物计数试验。

马塞尔Goverde MGP咨询

关于作者:Marcel在巴塞尔大学学习生物学,2001年获得博士学位。在诺华的农业生物部门获得了作为科学合作者的第一次工作经验。在哥斯达黎加开展发展项目,并在不同的学校教学。从2002年到2010年,他领导F. Hoffmann-La Roche Ltd的几个微生物QC实验室。从2010年到2011年,他担任Novartis Pharma Ltd的微生物学QC专家。自2011年以来,他一直经营自己的企业,以咨询、培训、项目和偏差管理命名MGP咨询有限公司.马塞尔经常在不同的机构演讲,写过几篇科学论文。自2003年起,他是EDQM现代微生物方法小组的瑞士专家,该小组于2015年被纳入group 1 (microbiological methods and Statistical Analysis)。Marcel是ECA制药微生物工作组的副主席,并拥有精益六西格玛的绿带。

最近的进展:

增强荧光其中微生物通过荧光检测到另一种系统,是由DIAMIDEX的MICA生物负载溶液。该产品过滤后,将板在将要并入本所有生长的微生物的细胞表面上的大分子修饰的代谢物的存在下孵育。在孵育(取决于所使用的板)所需的时间,小菌落,揭示由于将要点击到细胞表面的荧光探针。因此,增强的/扩增的荧光将使用包括在MICA设备的机器学习算法允​​许在非常早的阶段小菌落的检测。此外,MICA生物负载,其具有检测1 CFU的的限制可以被连接到系统LIMS(资料来源:双指数

最新消息

在PDA全球医药微生物会议上的现代微生物检验方法发布日期:2021年9月28日 扫描站®2021新功能发布时间:2021年8月3日 如何用户友好的膜过滤系统意味着得到它的正确的第一次!发布时间:二○二一年七月三十○日 查看所有

最新特色产品

实时细菌计数是新标准的微生物分析 为制药公司QC实验室设计的完整的水和生物负荷检测系统 高通量质量控制瓶装水 查看所有


供应商信息

+ATP / Bioluminesence发现3个产品

+自发荧光发现2种产品

+琼脂生长的自动检测找到1个产品

+琼脂半自动定量找到1个产品

+比色找到1个产品

+cytometr.找到1个产品

+内毒素发现2种产品

+滤膜系统发现3个产品



Lonza打赌

查尔斯河细菌内毒素检测能跟上需求

Luminultra提供快速准确的便携式军团菌测试解决方案

MCS Certablue

BAMSTM-免费网络研讨会

让我们eNewsletter
超过6000名微生物学专业人士获得我们每周的eNewsletter-立即订阅并了解原因!

微生物学最新新闻

微生物学事件雷电游戏app