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肠道病毒的快速检测与鉴定

要点

  • 与传统方法相比,节省了大量时间
  • 清晰、易于解释的结果
  • 简单、快速的操作允许在护理点使用

otavirus在这个概述中,“肠道病毒”一词指的是在人类和动物的肠道中发现的一组重要但多样的病毒。下面的表1列出了一些最重要的。它们主要与腹泻和肠胃炎有关,通常是轻度和自限性的,尽管该群体中的一些成员会引起无症状感染。

肠道病毒是全球胃肠炎最常见的病因,它们最常通过粪口途径传播,常见的是通过人类直接接触和污染物传播。感染剂量可能非常低。例如,一个轮状病毒就能引起人类感染。一些肠道病毒,特别是诺如病毒,具有高度传染性,可通过气溶胶和接触受污染的表面很容易传播,有时导致大规模疾病暴发。

肠道病毒也可能存在于受污染的水源中,水传播疾病的暴发并不罕见。食源性传播已被证明发生在一些病毒性胃肠炎暴发中。

表1。一些临床意义重大的肠道病毒
家族 类型
Astroviridae Mamastrovirus 人类astroviruses
腺病毒科 Mastadenovirus 人腺病毒
Caliciviridae 诺沃克病毒 诺瓦克病毒诺瓦克(类病毒)
札幌病毒 人类sapoviruses
科的 细小病毒 人类细小病毒
小核糖核酸科 肠病毒 非脊髓灰质炎肠道病毒:柯萨奇病毒A和B,埃可病毒,人类肠道病毒(68至71型)
呼肠孤病毒科 轮状病毒 人类轮状病毒

检测和隔离技术

取样和制备适当的取样程序对成功分离和检测肠道病毒至关重要。收集的材料可能包括临床样本,如粪便,和非临床样本,如水和食物。

对水样进行特定病毒污染和粪便污染指标(如腺病毒和肠道病毒)的测试。由于病毒只可能存在于低水平的水中,因此可能需要收集许多升的非常大的样本。检测水样中的肠道病毒需要在分离和检测之前进行专门的浓缩步骤。一些成功的方法包括吸附-洗脱技术,沉淀和超滤。

除了对特定商品,特别是双壳类软体动物进行肠道病毒检测外,没有常规做法对食品样本进行肠道病毒检测。双壳类软体动物在受污染的水中进食时,会在体内聚集病毒颗粒,是肠道病毒感染的已知危险。已经开发了用于检测贝类中肠道病毒的特定取样和病毒浓缩方法。

临床样本,特别是粪便样本,是肠道病毒常规检测的主要应用。已建立了用于诊断性病毒检测的临床样本采集程序,应密切遵循这些程序,以最大限度地提高发现病原体的机会。有些肠道病毒非常耐冷冻,样本可以在零下20度保存oC如果需要长期储存。

免疫学检测方法肠道病毒的大多数免疫学方法是基于抗原检测,并采用酶免疫分析(EIA)、乳胶凝集或免疫层析技术。

已经开发了广泛的商业产品,其中许多都是易于使用的工具包,可以在现场应用。例如,有一些玻片胶乳凝集试剂盒和横向流动免疫层析测试条可用来检测悬浮粪便样本中的轮状病毒和腺病毒。

这些测试操作简单,可在实验室外进行,以提供快速诊断。它们的主要缺点是,它们通常只是定性检测,灵敏度有限,无法区分感染性病毒。

分子检测方法除了腺病毒和细小病毒外,大多数肠道病毒都是RNA病毒,因此大多数分子技术依赖于检测特定的病毒RNA序列。通过关注病毒基因组,分子方法可以显著提高特异性和敏感性。已经为肠道病毒开发了许多核酸杂交方法,包括斑点杂交和三明治杂交技术,但它们的灵敏度通常比传统技术稍高。

允许对目标核酸序列进行扩增的技术使临床和非临床样本中的肠道病毒检测发生了革命性的变化。RNA病毒的主要扩增技术是逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)。理论上,这种技术能够在24小时内检测出单个病毒。扩增序列的检测可以在反应终点进行,也可以通过连续监测(real-time PCR)进行。实时PCR的优点是可以对病毒进行定量。有许多商业应用可用于检测肠道病毒,特别是肠道病毒。多重PCR方法已经开发出来,允许在同一试验中检测多个核酸序列,因此多个病毒类型。

还开发了其他核酸扩增方法,特别是核酸序列碱基扩增(NASBA)。这种技术也称为等温扩增,因为它不需要传统PCR方法中使用的重复温度循环。至少有一种NASBA的商业应用已被开发用于肠道病毒检测。PCR和相关方法的优点是可观的。主要的好处是节省时间——24小时即可得出结果,而不是几天或几周进行细胞培养分析。PCR还需要较少的操作员技能和培训,可以自动处理大量样本。它非常敏感,尽管它容易受到污染,并且无法区分感染性病毒。大多数PCR方法还需要一些昂贵的设备,不适合在实验室外使用。非定量PCR结果可能难以解释,因为可能检测到少量不表示感染的病毒,但实时PCR在很大程度上克服了这一问题。

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