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内容由EUROIMMUN AG提供

SARS-CoV-2免疫应答综合分析


分析SARS-CoV-2特异性体液和细胞免疫反应是评估COVID-19疫苗疗效的关键。

目前使用的大多数疫苗是基于SARS-CoV-2刺突蛋白。刺突蛋白S1亚基的受体结合域(RBD)负责与人类细胞受体血管紧张素转换酶2 (ACE2)结合,并介导病毒进入宿主细胞。针对S1/RBD和特异性长寿命T细胞的IgG类抗体似乎在病毒中和和持续免疫中发挥了最重要的作用。

EUROIMMUN提供强大的ce标记检测系统,用于定量检测抗s1 /RBD IgG抗体,测定这些抗体的中和作用,以及分析sars - cov -2反应的T细胞:

  • 抗sars - cov -2抗体(IgG) ELISA试剂盒: ce标记ELISA检测标准单位(BAU/ml)的抗s1 /RBD IgG浓度
  • SARS-CoV-2 NeutraLISA: ce标记的替代病毒中和试验,ELISA格式,用于检测针对S1/RBD的中和抗体
  • 全t细胞SARS-CoV-2 /全t细胞ELISA试剂盒:用于定量检测sars - cov -2特异性t细胞释放IFN-γ的ce标记干扰素释放试验(IGRA)

这一全面的分析支持了对感染或接种刺突蛋白疫苗后的免疫反应的评估。

定量抗体检测
定量测定S1/RBD抗体有助于评估个体感染后对SARS-CoV-2的免疫反应和测定接种后的免疫反应。

Anti-SARS-CoV-2 QuantiVac ELISA (IgG)是一种ce标记的全自动检测方法,可根据国际参考材料(NIBSC代码:20/136)使用六点校准曲线,以标准化结合抗体单位(BAU/ml)定量抗s1 /RBD IgG抗体浓度。

该检测结果与国际标准具有良好的相关性(图1)。抗sars - cov -2 QuantiVac ELISA (IgG)与不同中和试验也显示出非常好的结果一致性。

该试验验证了血清、血浆和干毛细管血作为样本材料。在一项首次使用Anti-SARS-CoV-2 QuantiVac ELISA (IgG)的研究中,57人在使用Moderna、辉瑞/生物技术公司(Pfizer/BioNTech)或阿斯利康(AstraZeneca)的疫苗首次和第二次免疫后的三周时间内分析了免疫应答。

结果表明,接种间隔时间越长,抗体浓度越高。此外,根据所使用的疫苗测定了不同的抗体浓度。第二次接种后采集的所有样本抗体浓度均很高。

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图1所示。抗sars - cov -2定量ELISA (IgG)与世界卫生组织国际标准的相关性研究

中和抗体的测定
通过测量抗S1/RBD抗体的中和活性,可以确认其抑制S1/RBD与ACE2结合并防止宿主细胞感染的功能。

ce标记的SARS-CoV-2 NeutraLISA是一种ELISA格式的替代病毒中和试验(sVNT),用于检测抗SARS-CoV-2抗体的抑制效果。

该测试程序是基于患者样本中和抗体和生物素化的ACE2受体之间的竞争性结合,以重组S1涂在微孔板上。样品中中和抗体浓度越高,颜色反应越弱。

该分析提供了一种快速和经济的替代金标准PRNT,这是昂贵和耗时的执行。与PRNT相比,SARS-CoV-2中和抗体不要求使用生物安全三级(BSL-3)实验室条件。

它只需要2个小时就可以执行,并且是自动化的,这使得它适合于常规诊断,包括在高吞吐量的情况下。试验表明,定性结果与PRNT的一致性为98.6%(表1)。

在上述研究中,使用SARS-CoV-2 NeutraLISA对57个样本进行了额外分析。结果证实,在接种疫苗的研究参与者的样本中检测到的抗体大部分是中和抗体。这些抗体对SARS-CoV-2感染提供了最大的保护。

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表1。比较SARS-CoV-2中和抗体检测和PRNT检测结果50

特异性T细胞分析
t细胞免疫,特别是对刺突蛋白的免疫,与对SARS-CoV-2的强保护有关,在特异性抗体浓度不明显的患者中发挥着特别重要的作用。

采用干扰素释放试验(IGRA)可以测定t细胞介导的细胞免疫应答对SARS-CoV-2。EUROIMMUN ce标记的Quan-T-Cell ELISA与Quan-T-Cell SARS-CoV-2联合使用,能够快速、自动化、定量测定SARS-CoV-2特异性T细胞释放的IFN-γ。

在测试过程中,在提供的试管中使用基于刺突蛋白的抗原刺激患者样本中的T细胞,随后使用全自动定量ELISA检测释放的IFN-γ。

该检测是在肝素化的全血样本上进行的,无需制备纯化的外周血单个核细胞(PBMCs)。根据一项研究,EUROIMMUN建议的临界值为200 mIU/ml,该研究使用了114份来自健康献血者的样本,这些样本对SARS-CoV-2的IgG和IgA抗体均呈阴性。

在一项进一步的内部研究中,使用EUROIMMUN IGRA对46例抗sars - cov -2 IgG和IgA抗体检测结果一致阳性或阴性的人的样本进行了调查。阳性样本的一致性为93.8%,阴性样本的一致性为96.7%,表明在大多数被测试者中同时存在体液和细胞反应。

EUROIMMUN IGRA在研究领域已建立良好的地位,其高质量已在许多外部研究(如1,2,3,4)中得到证实。基于对143个康复和接种个体样本的研究,诊断敏感性达到97.9%。而45份来自无COVID-19感染史的未接种者的样本的诊断特异性为97.8%(数据来自参考文献1,符合EUROIMMUN的截止建议)。

干扰素释放也被使用,与抗体测试,调查疫苗接种后免疫反应等弱势群体免疫力低下的人,老年人或透析病人(1、2、4)。因为有危险的人可能表现出减少或免疫反应不足,评估双臂的免疫反应是至关重要的,特别是考虑到加强注射的潜在策略。

结论
EUROIMMUN的这三种检测方法提供了对SARS-CoV-2的体液和细胞免疫应答的全面分析,为疫苗有效性评估以及COVID-19传播的流行病学研究提供了支持。

进一步的信息www.coronavirus-diagnostics.com

参考文献
1.Huzly et al。用于检测SARS-CoV-2特异性t细胞应答的新型干扰素-γ释放试验的验证和性能评估medRxiv 2021.07.17.21260316(2021)。

2.施瓦兹等。德国老年人BNT162b2疫苗的延迟抗体和t细胞反应新兴感染疾病27(8):2174-2178(2021)。

3.Hillus et al。ChAdOx1-nCoV19和BNT162b2的同源和异体启动-增强免疫的安全性、反应原性和免疫原性:一项前瞻性队列研究。《柳叶刀呼吸医学》(2021)在线出版

4.Schrezenmeier et al。慢性透析患者新冠肺炎托日美仑疫苗免疫原性研究前面。Immunol。12:690698 (2021)


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发表日期:2021年9月15日

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